飼料全面(miàn)禁抗以來，亟需開(kāi)發(fā)能(n作微éng)夠提高家兔生産性能(néng)，改善免疫劇習力，緩解應激的替抗産品，而益生菌制劑及其代謝産物的研發(fā)應煙術用為無抗養殖提供了可行途徑。目前，酵母菌和凝結芽孢杆菌在畜禽生産中和家應用報道(dào)較多，但在獺兔生産中應用的研究鮮有報道子算(dào)，且在其他畜禽生産中的應朋少用多為單獨使用，兩(liǎng)者聯合發(fā)都習酵時(shí)，由于凝結芽孢杆菌好(hǎo)氧發(fā)酵，可以加速酵日花母菌厭氧發(fā)酵過(guò)程樂得，保證底物發(fā)酵更徹底。因此，二者聯合發(fā)酵在理論上具船火有相互協同，效果疊加作用。
本試驗旨在研究飼糧中添加不同水平動子的酵母菌-凝結芽孢杆菌聯合發(fā)酵培養物對(duì)獺兔生長也謝(cháng)性能(néng)、養分表觀消化率、免疫力及抗氧化能(nén子生g)力的影響。為其在兔生産中的推廣應用提供參考。站少試驗選取160隻體重相近的健康35日齡獺兔，随機分為4組，每組8個重複，每唱鐘個重複5隻。對(duì)照組飼喂基礎飼糧，試驗組分别飼喂在近技基礎飼糧中添加0.01%、0.02%和0.04%酵母菌-報器凝結芽孢杆菌聯合發(fā)酵培養物的試驗懂家飼糧，預試期7 d，正試期56 d。1.1 生長(cháng)性能(néng)
在試驗期開(kāi)始和結束時(shí)的清晨各試驗兔空腹稱重，獲笑秒得初始體重和終末體重，計算平均日增重( ADG)；準确不開記錄試驗期内每個重複的采食量，計算平均日采食量( ADFI)和愛科料重比( F/G)；記錄試驗期内試驗兔腹瀉隻日數(隻日數：每隻兔腹瀉的天數；微門腹瀉判斷：糞便不成(chéng)球、稀軟，呈粥狀呢什或水樣(yàng)，後(hòu)肢、肛門和尾部被(bèi)毛被(b樹樹èi)糞便污染，計算腹瀉頻率。計算公式國車如下：ADG(g/d)=(終末體重-初始體重)/麗鐵試驗天數；ADFI(g/d)=問站總采食量/試驗天數；F/G=總采食量/總增重；腹瀉飛短頻率(%)=[試驗期内腹瀉隻日數/(試驗天數x試驗隻見西數) ]x100。
1.2 養分表觀消化率
試驗期結束前7d，每個組以重複為單位選擇8隻接近平均體重的試驗理冷兔，進(jìn)行消化代謝試驗，采用全收糞法，記錄司要試驗兔每日采食量，收集全部糞便，稱重後(hòu)分為2份，一份加10%鹽酸固熱劇氮，用于測定粗蛋白質(CP)含量，另一份測定其他訊雪養分含量。糞樣(yàng)烘幹粉碎，放人樣(yàng)這內品袋中備測。參照張麗英[16]的方法測定飼糧及糞中各養分書術含量。養分表觀消化率計算公式如下：某養分表觀消化率(%)= 100*(飼東身糧中該養分含量-糞中該養分含量)/飼糧中該養分含量。1.3 血清免疫和抗氧化指标測定
試驗期第56天空腹稱重，每組挑選8隻試驗兔(每個重複挑化路選1隻)，每隻試驗兔耳緣靜脈采血5 mL，謝公3 500r/ min離心10 min，取上清液，-2老跳0C保存備測。采用酶聯免疫檢測(EL店湖ISA)試劑盒測定血清免疫和抗氧化指海錯标，試劑盒購自北京博銳長(cháng)遠科技有限公司，具體操作按照說(s空愛huō)明書步驟進(jìn)行。所測血清免疫指标包括免疫球蛋白A(IgA)、免吃大疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)和白細胞介素-4(IL-4)月裡含量，所測血清抗氧化指标包括谷胱甘肽過(guò)術說氧化物酶( GSH-Px)、超氧化物水事歧化酶( SOD)活性及總抗氧化能(néng)舞鐘力( T-AOC)和丙二醛( MDA)含量。
1.4 免疫器官指數和組織抗氧化指畫關标測定
將(jiāng)采完血後(hòu)的試驗兔屠宰，取胸腺、脾髒和圓小囊舊業稱重，計算胸腺指數、脾髒指數和圓小囊指數。計算公式如下：髒器指數(g電子/kg)=髒器鮮重(g)/宰前活重(kg)。取肝髒和空腸腸段術說，切割稱重，加入磷酸鹽緩沖液(PBS) ，低溫研磨後(hòu)離心，錢呢取上清液，-20 C保存備測。采用酶聯免疫店熱吸附測定( ELISA)試劑盒測定GSH-Px、SOD活性以及T說就-AOC和MDA含量，試劑盒購自北京博銳長(cháng)遠科技有限公司，具體操作按照說(shuō)明書步驟進(jìn)行。1.5 腸道(dào)消化酶活性
屠宰後(hòu)，取空腸、回腸和盲腸食糜放人凍存管中時玩，-80 C保存備測。采用ELISA試劑盒測定空腸、回腸和盲腸x-澱粉酶、脂哥看肪酶、胰蛋白酶和盲腸纖維素酶活性，試劑盒購自北京博銳長(chán費金g)遠科技有限公司，具體操作按照說(sh員湖uō)明書步驟進(jìn)行。
1.6 數據統計分析
試驗數據采用SPSS 20.0 軟件進(jìn)行單因素方差分析，并影報采用Duncan氏法進(jìn)吃子行多重比較檢驗，結果采用“平均路火值+标準誤"表示，以P<0.05表示差異顯著，0.05≤遠那P<0. 10表示有趨勢。
2.1 酵母菌-凝結芽孢杆菌聯能月合發(fā)酵培養物對(duì)獺兔生長(cháng)性能(néng爸村)的影響
動物的生長(cháng)速度和飼料報酬是衡量動物生長(cháng)性門船能(néng)的關鍵指标，同時(shí)子金還(hái)可以間接反映出飼料的營養價值。酵母培養物和凝結芽孢杆菌在促進(j西上ìn)動物機體生長(cháng)發(fā)育、改善腸道(劇遠dào)健康、提高飼料報酬和增強機體免疫力等方面(miàn)具有積極作用。小姐
本試驗發(fā)現，飼糧中添加酵母菌-凝結芽孢杆菌聯合發制的(fā)酵培養物顯著提高了獺兔的ADG，F/G呈降低趨勢，這(zhè)可能(néng)是因為酵母菌-凝結芽孢杆菌聯合發(fā)酵培養物兼具了酵母培養物和凝熱動結芽孢杆菌兩(liǎng)者優點，酵母培養物營養豐富，富含β-葡聚糖、甘露寡糖、氨基酸和維生素等，能(視個néng)夠為機體提供營養物質、未知生影討長(cháng)因子及多種(zhǒng)免疫因子，在促進(jìn)司也動物生長(cháng)發(fā藍知)育中也起(qǐ)到(dào)積極作用。凝結芽孢杆菌代謝産生的多種(zhǒng)營養物質供機體吸收利用，如氨基酸、什秒維生素、短鍊脂肪酸和促生長(cháng)因子等，酵你你母菌代謝産物中的抑菌活性肽能(néng)夠降低腸道(dà店黑o)有害菌數量級，凝結芽孢杆菌在腸道(dào)定植，房飛消耗腸道(dào)中遊離氧，創造低氧環境，抑制需氧型有害海用菌和腐敗微生物生長(cháng)，外友在兩(liǎng)者共同作用下減少在窗了有害菌對(duì)營養物質的消耗，從而討紅達到(dào)促生長(cháng)作用。
本試驗中，各添加組腹瀉頻率均低于對月費(duì)照組。這(zhè)可能(néng)是因為：一方面(miàn)，酵母菌代謝産物抑菌活性肽和凝結芽孢杆菌代謝産生的凝固素快來可以破壞革蘭氏陽性和陰性緻病菌細胞膜，起(qǐ)到(dào)抑菌音明作用，而.抑菌活性肽還(hái)能(néng內相)夠加速受損腸道(dào)黏膜修複，使得腸道(dào)緻病菌減少，腹瀉頻率降他器低；另一方面(miàn)，酵母細胞壁成(chéng)分甘露寡糖可以結合革蘭氏陰不時性緻病菌，減少緻病菌在腸壁上的黏附和繁殖
2.2 酵母菌-凝結芽孢杆菌聯合發(fā)酵培養物對(d看現uì)獺兔養分表觀消化率的影響
飼糧中的營養物質在動物小腸内的消化方式為機械性消化(如腸道(dào)蠕動)男筆和化學(xué)性消化(如消化酶)，2種(zhǒng)方式共同作用于營養物會站質的消化。本試驗中，0.01%和0.02%添加組Ca的表觀消化率事少較對(duì)照組顯著提高，0.04%添加組DMGE、CP和Ca的路歌表觀消化率顯著高于對(duì)照組。分析以上結果原因，我們認為可能(néng現放)是酵母培養物所包含的氨基酸、有機酸、聚糖、寡糖和B族維生素等物哥高質改善了腸道(dào)微生态環境，而凝結芽孢杆菌又可以促進(jìn)腸道(煙購dào)蠕動，加快飼料在腸道(dào)中消化 ，酵母菌煙商-凝結芽孢杆菌聯合發(fā)酵培養物集兩(liǎng)者的共同功能(裡妹néng)，促進(jìn)了獺兔對(duì)飼料的消化吸笑又收。
2.3 酵母菌-凝結芽孢杆菌聯合發(fā)酵培養物對(duì)獺兔腸道(dào用劇)消化酶活性的影響
由表4可知，與對(duì)照組相比，各添加組空腸、回腸和盲腸中門白消化酶活性無顯著提高。這(zhè)可能(néng)是因為菌種(zhǒng)和培養離得物的某些活性在實驗室内給予合适條件才得以體是喝現，而實際動物試驗中各種(zhǒng關村)不利條件及胃腸道(dào)的區在複雜環境在一定程度上會(huì樹小)抑制菌種(zhǒng)和培養物理化特性的有效發(嗎計fā)揮。2.4 酵母菌-凝結芽孢杆菌聯合發(fā)酵培養物對(duì)獺兔免疫器官指數讀嗎的影響
由表5可知，各組間胸腺指數、脾髒指數和圓小囊指數均無顯著差異( 了有P>0.05)。
2.5 酵母菌-凝結芽孢杆菌聯小信合發(fā)酵培養物對(duì)獺兔血清免飛這疫指标的影響
由表6可知，0.01%、0.02%和0空地.04%添加組血清IgA含量分别子區較對(duì)照組提高36.75%、25.09%和29.90%，差科新異顯著( P<0.05)；0.04%添加組血清IgG含量暗筆較對(duì)照組提高12.03%，呈提高趨勢(0.05≤P<請什0.10)；各組間血清IgM含量差異不顯著(P>0.05)；各添加組好拿血清IL-4含量均較對(duì)子紅照組顯著提高( P<0.頻輛05)。
免疫系統由免疫器官、免疫細胞和免疫活性物質組成(chéng)，麗好是機體免疫機能(néng)的保障。酵母培養物不僅可以增強機體合成(chéng)蛋白質，還(hái)可以提煙微高血清免疫球蛋白含量。邢冠潤等研究發(fā)現，飼糧中添加不同濃度凝結芽孢杆菌可顯著提高坐飛産蛋後(hòu)期蛋雞血清中IgA、IgG和IL-4的含量，但靜坐對(duì)血清IgM含量無顯著影響；同時(shí)其表明，凝結芽孢杆西市菌的發(fā)酵上清液及細胞壁成(chéng)分可調節細胞因子和增強紅科細胞吞噬作用。Fu等在斷奶仔豬飼糧中添加400 m近他g/kg凝結芽孢杆菌後(hòu)增加了血清中補體3購還(C3)、溶菌酶(LZM)和腫店煙瘤壞死因子-x(TNF-a)的含量，使水通仔豬機體免疫應答能(néng)力增強。本試驗中，各組間免疫器官指數均無顯著差異，表明酵母菌-凝結芽孢杆菌聯合發作但(fā)酵培養物未對(duì)獺兔免疫器官發(門黑fā)育造成(chéng)不良鐘區影響；添加酵母菌-凝結芽孢杆菌聯合發(fā)酵培養物顯著提舞有高了獺兔血清中IgA和IL-4含量，0.04%添加組血亮唱清IgG含量較對(duì)照組呈提高趨勢，與以上研究結技件果相一緻。分析認為，可能(néng)是酵母菌-凝結芽孢杆菌聯合發人又(fā)酵培養物中的酵母多糖及凝結芽孢杆菌代謝産物日少促進(jìn)了T淋巴細胞增殖，進(jìn)而使IL-答得4産量增加，IL-4又進(jìn)一步地促進(jìn)B淋巴細胞增殖和分近睡化，刺激B淋巴細胞合成(chéng)和分泌抗體。開靜
2.6 酵母菌-凝結芽孢杆菌聯合睡子發(fā)酵培養物對(duì)獺兔血清、肝暗老髒和空腸抗氧化指标的影響
GSH-Px、SOD活性和T-AOC高低是衡量機體抗氧化能(nén月章g)力的重要指标，MDA是脂質氧化終産物，對(通笑duì)細胞形态細胞膜及細胞内部結時內構有損傷作用，因而測定MDA含量可反映機體脂質過(guò)氧化程度，一照間接反映細胞損傷程度。張彩鳳研究表明，飼糧中添加0.1%的乳酸菌和酵母菌複合制劑可顯著提高肉仔雞那吃的血清T-AOC和GSH-Px活性，習用顯著降低血清MDA含量，增強機體抗氧理村化能(néng)力，降低機體内脂質過(guò)氧化程度。凝結芽孢杆菌能(n喝電éng)夠通過(guò)提高回腸黏膜GSH-Px活性和降低脂質氧化産物MDA地行含量，來減輕斷奶仔豬氧化應激。餘魁等研究表明，添加2.0x106CFU/g凝結芽孢杆菌可以顯著提高仔豬血漿SOD活性，且子間使MDA含量顯著降低。酵母菌-術雜凝結芽孢杆菌聯合發(fā)酵培養物司飛是由酵母菌和凝結芽孢杆菌聯合發(fā)酵而成(chéng什一)，在抗氧化作用上具有協同作用。本次試驗結果表明，飼糧中添加酵母菌-凝習亮結芽孢杆菌聯合發(fā)酵培養物，血清厭多、肝髒和空腸的GSH-Px和SOD用購活性及T-AOC均無顯著變化，與上述研究結果不同，這要雪(zhè)可能(néng)與物種(zh厭冷ǒng)、養殖環境和管理差異等有關，有待進(jìn玩鄉)一步研究。本試驗中，各添加組血清和肝費員髒MDA含量均較對(duì)照組有所降低，0.02%和0.04了志%添加組空腸MDA含量較對(duì)照組呈降低趨勢，表明動物機體内膜道煙脂質過(guò)氧化程度減輕。其原因可能(néng)是：一方大討面(miàn)，酵母培養物中的酵母多糖及核酸物質是一種(zh笑工ǒng)高效的内源性自由基清除劑和們她抗氧化劑，因此獺兔機體脂質過(guò)氧化程度減輕；另一方面(mi黑術àn)，凝結芽孢杆菌在腸道(dào)内定植後(hòu)，産討章生了能(néng)夠清除體内羟自弟民由基和超氧陰離子自由基的胞外多糖。
3、結論
飼糧中添加酵母菌-凝結芽孢杆菌聯合發(fā)酵培養物可火知以顯著提高獺兔的ADG，改善獺兔生長(cháng)性能(né數麗ng)，降低腹瀉頻率，提高養分表行舊觀消化率。飼糧中添加酵母菌-凝結芽孢杆菌聯合發(fā)酵培養為家物可顯著提高獺兔血清中IgA和IL-4含雜電量。綜合分析，獺兔飼糧中酵母菌-凝結芽孢杆菌聯合發(fā)酵北上培養物适宜添加水平為0.02% 照有~0.04%。[王國(guó)洲，吳峰洋，于志凱，孔令昌，劉亞娟，陳寶江]
